Tests sérologiques

Dans notre laboratoire, nous testons la présence d'anticorps spécifiques contre diverses infections en utilisant les méthodes SeraSpot, IFT et ELISA. En général, SeraSpot présente une spécificité et une sensibilité comparativement plus élevées que les techniques IFT et ELISA. Cependant, la formation d'anticorps spécifiques contre Borrelia burgdorferi peut être inhibée ou supprimée par une thérapie antibiotique. De tels cas peuvent souvent être diagnostiqués en utilisant l'EliSpot.

SeraSpot

Le SeraSpot MicroArray pour la détermination des anticorps contre Borrelia burgdorferi combine la technique ELISA standardisée et établie avec l'analyse de microarray. Des antigènes hautement spécifiques de Borrelia burgdorferi sont appliqués sous forme de points au fond des puits d'une plaque microtitrée à l'échelle des nanolitres. Des contrôles sont intégrés dans chaque puits.

ELISA

L'ELISA est une méthode sérologique utilisée pour détecter les anticorps dans des échantillons biologiques. Dans cette procédure, les antigènes sont immobilisés sur un support solide, tel que le fond d'une plaque microtitrée. L'échantillon contenant les anticorps à tester est ensuite ajouté au support. Si des anticorps spécifiques sont présents dans l'échantillon, ils se lient aux antigènes immobilisés. Après avoir éliminé les substances non liées par lavage, un anticorps secondaire couplé à une enzyme est ajouté, lequel se lie aux anticorps primaires. L'ajout d'un substrat pour l'enzyme produit un signal mesurable, fournissant des informations sur la présence et la quantité d'anticorps spécifiques dans l'échantillon.

IFT – Test d'Immunofluorescence

Le Test d'Immunofluorescence est une autre méthode sérologique couramment utilisée pour identifier les anticorps contre des antigènes spécifiques. Dans cette procédure, les antigènes sont appliqués sur un support solide, similaire à l'ELISA. L'échantillon est ensuite ajouté au support, et si des anticorps spécifiques sont présents, ils se lient aux antigènes. Par la suite, un anticorps secondaire marqué par fluorescence est ajouté, se liant aux anticorps primaires. Sous excitation par une lumière de longueurs d'onde spécifiques, les anticorps marqués par fluorescence émettent de la lumière, qui peut être visualisée avec un microscope à fluorescence. La présence de fluorescence indique la présence d'anticorps spécifiques dans l'échantillon.

Immunoblot

L'immunoblot, également connu sous le nom de Western blot, est une méthode avancée pour identifier les protéines dans des échantillons biologiques. En cas d'infections, cette méthode est souvent utilisée pour confirmer la présence d'anticorps spécifiques contre certaines protéines ou antigènes. Tout d'abord, les protéines sont séparées par électrophorèse en fonction de leur taille, puis transférées sur un support solide, tel qu'une membrane en nitrocellulose. L'échantillon est ensuite appliqué sur le support, et si des anticorps spécifiques sont présents, ils se lient aux protéines correspondantes. Par la suite, les anticorps liés sont visualisés, souvent par l'ajout d'un anticorps secondaire marqué par une enzyme ou par fluorescence et d'un substrat approprié. Les motifs de bandes générés par l'immunoblot peuvent fournir des informations sur la présence et la spécificité des anticorps dans l'échantillon.

Immunoarray

L'Immunoarray, également connu sous le nom de microarray, est une méthode sérologique avancée pour détecter les anticorps dans des échantillons biologiques. Similaire au SeraSpot MicroArray, l'Immunoarray permet l'analyse simultanée de divers anticorps contre des antigènes spécifiques. En utilisant des quantités nanolitrées d'échantillons, les antigènes peuvent être immobilisés sur des microarrays, permettant une analyse précise et hautement sensible. Cette technologie offre une caractérisation efficace et complète de la réponse immunitaire du patient aux infections telles que la maladie de Lyme et contribue à un diagnostic et un traitement plus précis.

Les infections borrelieuses ne peuvent pas être complètement exclues en raison de résultats négatifs aux tests sérologiques. Les laboratoires devraient rechercher le "VIsE" (acronyme pour : Variable major protein-like sequence Expressed) dans les systèmes de test ELISA et SeraSpot. Le VIsE décrit la capacité de la Borrelia burgdorferi, surnommée le "caméléon", à modifier en permanence sa structure protéique VIsE in vivo pour éviter la détection par le système immunitaire. Lors de la recherche d'anticorps contre Borrelia burgdorferi, le VIsE présente la plus haute sensibilité.

Résultats d'études et comparaisons de tests

• "Dans le cas de l'ELISA, des résultats positifs ou borderline ont été observés chez seulement 24 patients (53,3%)." (Wojciechowska-Koszko et al., février 2011)
• "32 patients ont eu des anticorps anti-borrelia spécifiques confirmés par l'utilisation du western blot malgré un ELISA négatif… Chez les patients ayant des difficultés persistantes, il est nécessaire d'utiliser le test western blot… Cela est probablement dû à la production très faible d'anticorps spécifiques, également causée par le statut de déficience immunitaire détecté chez tous nos patients." (Durovska et al., 2010)
• "Le nombre de résultats ELISA positifs et/ou borderline… variait de 34 à 59 %... La comparaison des immunoblots a montré de grandes différences dans l'accord inter-test… Il est remarquable que certains immunoblots ont donné des résultats positifs dans des échantillons ayant été testés négatifs par les huit ELISA." (Ang CW et al., janvier 2011)

Le SeraSpot MicroArray analyse les anticorps IgG et IgM suivants contre Borrelia burgdorferi et les sous-espèces de Borrelia burgdorferi avec une grande spécificité:

VlsE (Borrelia burgdorferi afzelii), p39 (B.b. afzelii), p58 (B.b. garinii), p100 (B.b. afzelii), OspC (B.b. afzelii + B.b. garinii + B.b. sensu stricto), DbpA (B.b. afzelii + B.b. garinii + B.b. sensu stricto).