Tests
Pruebas serológicas
SeraSpot, ELISA, IFT, inmunoblot y el inmunoarray son métodos serológicos para diagnosticar enfermedades infecciosas. Identifican anticuerpos o antígenos.
Métodos serológicos
En nuestro laboratorio, analizamos anticuerpos específicos de varias infecciones utilizando los métodos SeraSpot, IFT y ELISA. Generalmente, SeraSpot tiene una especificidad y sensibilidad comparativamente más altas que las técnicas IFT y ELISA. Sin embargo, la formación de anticuerpos específicos contra Borrelia burgdorferi puede ser inhibida o suprimida por la terapia con antibióticos. Estos casos a menudo pueden ser diagnosticados utilizando el EliSpot.
SeraSpot
El MicroArray SeraSpot para la determinación de anticuerpos de Borrelia burgdorferi combina la técnica estandarizada y establecida de ELISA con análisis de microarrays. Antígenos altamente específicos de Borrelia burgdorferi se aplican como puntos en el fondo de los pocillos de placas de microtitulación a escala nanolítica. Los controles están integrados en cada pocillo.
ELISA
ELISA es un método serológico utilizado para detectar anticuerpos en muestras biológicas. En este procedimiento, los antígenos se inmovilizan en un soporte sólido, como el fondo de una placa de microtitulación. Luego se añade la muestra que contiene los anticuerpos a analizar. Si hay anticuerpos específicos en la muestra, estos se unirán a los antígenos inmovilizados. Tras lavar las sustancias no unidas, se añade un anticuerpo secundario enlazado a una enzima, el cual se une a los anticuerpos primarios. Al añadir un sustrato para la enzima, se genera una señal medible, que proporciona información sobre la presencia y cantidad de anticuerpos específicos en la muestra.
IFT – Prueba de Inmunofluorescencia
La Prueba de Inmunofluorescencia es otro método serológico comúnmente utilizado para identificar anticuerpos contra antígenos específicos. En este procedimiento, los antígenos se aplican a un soporte sólido, similar al ELISA. Luego se añade la muestra al soporte, y si hay anticuerpos específicos presentes, se unirán a los antígenos. Posteriormente, se añade un anticuerpo secundario marcado con un fluoróforo, que se une a los anticuerpos primarios. Al excitarse con luz de longitudes de onda específicas, los anticuerpos marcados emiten luz, que se puede visualizar con un microscopio de fluorescencia. La presencia de fluorescencia indica la presencia de anticuerpos específicos en la muestra.
Inmunoblot
El inmunoblot, también conocido como Western blot, es un método avanzado para identificar proteínas en muestras biológicas. En el caso de infecciones, este método se utiliza frecuentemente para confirmar la presencia de anticuerpos específicos contra ciertas proteínas o antígenos. Primero, las proteínas se separan mediante electroforesis según su tamaño y luego se transfieren a un soporte sólido, como una membrana de nitrocelulosa. La muestra se aplica al soporte, y si hay anticuerpos específicos presentes, se unen a las proteínas correspondientes. Posteriormente, los anticuerpos unidos se visualizan, a menudo añadiendo un anticuerpo secundario marcado con enzimas o fluoróforos y un sustrato apropiado. Los patrones de bandas generados por el inmunoblot pueden proporcionar información sobre la presencia y especificidad de anticuerpos en la muestra.
Inmunoarray
El inmunoarray, también conocido como microarray, es un método serológico avanzado para detectar anticuerpos en muestras biológicas. Similar al MicroArray SeraSpot, el inmunoarray permite el análisis simultáneo de una variedad de anticuerpos contra antígenos específicos. Utilizando cantidades nanolíticas de muestras, los antígenos pueden inmovilizarse en microarrays, permitiendo un análisis preciso y altamente sensible. Esta tecnología proporciona una caracterización eficiente y completa de la respuesta inmune del paciente a infecciones como la enfermedad de Lyme, lo que contribuye a un diagnóstico y tratamiento más precisos.
Desafíos en el diagnóstico serológico de la enfermedad de Lyme:
Las infecciones por borreliosis no pueden ser completamente descartadas debido a resultados negativos en pruebas serológicas. Los laboratorios deberían investigar el "VIsE" (acrónimo de: Variable major protein-like sequence Expressed) en los sistemas de prueba ELISA y SeraSpot. VIsE describe la capacidad del "camaleón" Borrelia burgdorferi para cambiar permanentemente su estructura de proteína VIsE in vivo para evitar la detección por el sistema inmunológico. Al buscar anticuerpos contra Borrelia burgdorferi, VIsE tiene la mayor sensibilidad.
Resultados de estudios y comparaciones de pruebas
- “En el caso de ELISA, se observaron resultados positivos o al límite en solo 24 pacientes (53,3%).” (Wojciechowska-Koszko et al., feb. 2011)
- “32 pacientes tuvieron anticuerpos antiborreliales específicos confirmados mediante western blot a pesar de un ELISA negativo… En pacientes con dificultades persistentes, es necesario utilizar la prueba de western blot… Probablemente se debe a la producción muy baja de anticuerpos específicos causada también por el estado de inmunodeficiencia detectado en todos nuestros pacientes.” (Durovska et al., 2010)
- “El número de resultados positivos de ELISA para IgM y/o IgG… osciló entre el 34% y el 59%... La comparación de inmunoblot mostró grandes diferencias en la concordancia entre pruebas… Notablemente, algunos inmunoblot dieron resultados positivos en muestras que habían dado negativo en los ocho ELISA.” (Ang CW et al., ene. 2011)
El MicroArray SeraSpot analiza los siguientes anticuerpos IgG e IgM contra Borrelia burgdorferi y subespecies de Borrelia burgdorferi con alta especificidad:
VlsE (Borrelia burgdorferi afzelii), p39 (B.b. afzelii), p58 (B.b. garinii), p100 (B.b. afzelii), OspC (B.b. afzelii + B.b. garinii + B.b. sensu stricto), DbpA (B.b. afzelii + B.b. garinii + B.b. sensu stricto).
