Tests

EliSpot

L'EliSpot è una tecnologia utilizzata per valutare la risposta immunitaria funzionale delle cellule T a vari antigeni attraverso saggi immunoenzimatici a spot (EliSpot).

Eli Spot lyme coinfections plate washing

Opzioni diagnostiche con EliSpot

Il nostro laboratorio impiega l'EliSpot come una delle tecnologie chiave per misurare l'immunità cellulare e aiutare nella diagnosi di varie infezioni difficili da rilevare.

Un ampio spettro di malattie testabili:

L'EliSpot consente l'esame di una varietà di infezioni e patogeni, tra cui agenti ben noti come Ehrlichia e Anaplasma, Bartonella, Babesia, nonché infezioni virali causate dal virus Epstein-Barr (EBV), herpes simplex, citomegalovirus e altri.

Una profonda comprensione del sistema immunitario: Misurando la risposta immunitaria cellulare, l'EliSpot non solo offre la possibilità di monitorare l'efficacia delle terapie, ma fornisce anche informazioni sulle risposte immunitarie mediate dalle cellule T in una varietà di infezioni. La sua alta sensibilità e specificità lo rendono uno strumento prezioso nella diagnosi e nel monitoraggio delle malattie infettive.

EliSpot – Uno strumento versatile nella diagnostica delle malattie infettive

Il nostro laboratorio utilizza la tecnologia EliSpot per diagnosticare e monitorare una vasta gamma di infezioni. Grazie alla sua ampia applicabilità e alla sua capacità di catturare accuratamente la risposta immunitaria cellulare, l'EliSpot contribuisce significativamente alla diagnosi e al trattamento preciso delle malattie infettive.

L'EliSpot per la Borrelia può risolvere alcuni problemi

  • Il test riflette l'attività attuale della Borrelia burgdorferi nelle infezioni croniche e recenti da Borrelia burgdorferi.
  • L'EliSpot è altamente sensibile e può rilevare anche un singolo linfocita T reattivo a Borrelia burgdorferi. Con livelli di rilevamento che possono essere bassi fino a una cellula su 100.000, l'EliSpot è uno dei test cellulari più sensibili disponibili.
  • L'EliSpot è da 20 a 200 volte più sensibile di un ELISA convenzionale.
  • L'EliSpot mostra una sensibilità simile a quella di un'analisi RT-PCR (Reazione a Catena della Polimerasi in Tempo Reale), ma rileva la proteina secreta anziché l'mRNA (RNA messaggero).
  • L'EliSpot può essere utile nel monitoraggio delle terapie. L'EliSpot dovrebbe solitamente diventare negativo circa 4-8 settimane dopo il completamento di una terapia efficace.

Cosa può essere testato con l'EliSpot?

Borreliosi di Lyme
Ehrlichia & Anaplasma
Bartonella
Babesia
Chlamydia pneumoniae
Chlamydia trachomatis
Micoplasmi
Yersinia
Rickettsia
Epstein-Barr-Virus (EBV)
Herpes simplex Virus (HSV)
Cytomegalovirus (CMV)
Varicella zoster virus (VZV)
HHV6-Virus
HHV7-Virus
Candida albicans
Aspergillus Peptid

Malattia di Lyme

Le infezioni da Borrelia burgdorferi non solo suscitano una risposta immunitaria umorale sotto forma di produzione di anticorpi specifici per Borrelia, ma attivano anche la risposta immunitaria cellulare sotto forma di linfociti T specifici (test EliSpot). Una volta che la Borrelia non è più attiva nel corpo, la risposta immunitaria cellulare dovrebbe diminuire rapidamente, portando a un test EliSpot negativo.

Generalmente non è possibile valutare il successo del trattamento di una terapia efficace per la malattia di Lyme utilizzando gli anticorpi anti-Borrelia, poiché il "titolo" anticorpale nel sangue può persistere per anni. Le infezioni recentemente acquisite da Borrelia burgdorferi (ad es. sintomi di eritema migrante o influenza estiva dopo un morso di zecca) si manifestano spesso settimane dopo sotto forma di produzione di anticorpi. Inoltre, il rilevamento di anticorpi specifici per Borrelia può dare risultati negativi nonostante un'infezione effettiva a causa di una scarsa standardizzazione e della bassa sensibilità dei test ELISA e immunoblot. In questi casi, il test EliSpot per la Borrelia può spesso colmare il divario diagnostico.

L'EliSpot per la Borrelia può risolvere alcuni di questi problemi.

  • Il test riflette l'attività attuale del patogeno sia nelle infezioni croniche che in quelle fresche/acute (Nota: eritema migrante o influenza estiva dopo morso di zecca) da Borrelia burgdorferi.
  • L'EliSpot è altamente sensibile e può rilevare anche una singola cellula T che risponde alla Borrelia burgdorferi. Con limiti di rilevamento fino a una cellula su 100.000, l'EliSpot è uno dei metodi di test cellulari più sensibili disponibili.
  • L'EliSpot è da 20 a 200 volte più sensibile di un test ELISA per anticorpi regolare.
  • Pertanto, l'EliSpot è altrettanto sensibile di un test RT-PCR (Reazione a Catena della Polimerasi in Tempo Reale), ma rileva la proteina del patogeno anziché l'mRNA (RNA messaggero).
  • L'EliSpot può essere utile nel monitoraggio delle terapie. Dovrebbe generalmente tornare negativo 4-8 settimane dopo la fine di una terapia efficace.

EliSpot Borrelia

T-Cell-Spot / IGRA: Saggio di Rilascio di Interferone-Gamma

Antigeni dell'EliSpot per la Borrelia:

  • Antigene completo di Borrelia burgdorferi: ceppo di riferimento B31 di Borrelia burgdorferi (Borrelia burgdorferi sensu stricto)
  • Mix di Peptidi di Borrelia burgdorferi: OspA da Borrelia b. sensu stricto, Borrelia afzelii, Borrelia garinii + OspC nativo + DbpA ricombinante
  • LFA-1 di Borrelia burgdorferi (Antigene della Funzione Linfocitaria 1): proteina del corpo umano + Borrelia burgdorferi sensu stricto (epitopo condiviso). Spesso associato a malattie autoimmuni: collagenosi, Artrite Reumatoide, vasculite (ANA, anticorpi CCP, ANCA)

Spiegazione: Nativo = antigeni coltivati / Ricombinante = prodotto con tecnologia genetica

Riflessione sull'attività cellulare T attuale nella malattia di Lyme:

Indicazione di un'infezione attiva da Borrelia burgdorferi nei casi di test EliSpot positivo anche dopo la fine delle terapie.
Il T-Cell-Spot/IGRA è stato approvato dalla FDA nel maggio 2011 per M. tuberculosis: "... Un risultato positivo suggerisce che un'infezione è probabile, un risultato negativo suggerisce che un'infezione è improbabile..." "...I risultati possono essere disponibili entro 24 ore..."

EliSpot: il nuovo test delle cellule T è un "Game Changer" per la malattia di Lyme:

  • La sensibilità dell'EliSpot è stimata all'84% e la specificità al 94%.
  • I saggi EliSpot forniscono dati robusti e altamente riproducibili.
  • L'EliSpot può essere ripetuto per l'acquisizione di informazioni aggiuntive in saggi di follow-up.
  • I due sistemi di saggio (EliSpot + conteggio delle cellule CD57) si completano a vicenda nella comprensione dell'immunità mediata dalle cellule T in vivo.

Main article in the "Clinical Infectious Diseases Journal"

Scientific article addressing the determination of IFN-γ secretion from T cells isolated before and after successful treatment of an acute Borrelia infection.
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Referenze:

Lehman PV et al.: Unique Strengths of EliSpot for T Cell Diagnostics in: Kalyuzhny AE. Handbook of EliSpot: Methods and Protocols, Methods in Molecular Biology, Vol. 792. 2nd Ed: Springer; 2012: 3-23